### 培养条件

细胞培养的基本条件包括使用1640培养基，添加10% FBS和1% PS，适用于贴壁和悬浮细胞。培养环境需要保持在37℃的温度下，以保证细胞的健康生长。

### 传代方法

对于细胞传代，推荐的比例是1:2。如果细胞未达到80%的汇合度，可以先收集培养液，留下5ml完全培养基，并置于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养；当细胞密度超过80%时，即可进行传代。

### 更换培养液

每两天建议更换一次培养液，以维持细胞的最佳生长状态。

### 细胞处理

收到细胞后，应立即使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态，随后可进行细胞观察和处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

### 细胞传代步骤

细胞传代的操作步骤如下：

1. 弃去培养液，然后用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞变圆脱落，迅速加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

### 悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞传代可采用半换液法或离心换液法。

1. 半换液法：轻轻吸掉3ml培养基，补给3ml完全培养基；如需分瓶，按照1:2的比例进行。
2. 离心换液法：收集细胞悬液于离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃上清后重悬再分瓶培养。

### 细胞冻存与复苏

当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次，添加0.25%胰蛋白酶消化液消化，然后轻轻吹打使其脱落。弃去上清后加入无血清冻存液混匀，转移至冻存管中，最后放入-80℃冰箱存放。

解冻时，将冻存管快速置入37℃水浴中，待无冰晶后，用75%酒精擦拭外壁，转移至含5ml完全培养基的离心管中离心，弃上清后重悬，接种至培养箱中继续培养。

### 注意事项

在细胞运输过程中可能会有细胞脱落现象，这属于正常情况。如脱落细胞较多，可通过离心收集沉淀后进行处理与传代。

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