人B细胞淋巴瘤OCILy19培养指导手册

本文档旨在为研究人员提供人B细胞淋巴瘤OCILy19的细胞培养指南，以便有效地促进该细胞系的研究和应用。

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议按照1:2的比例进行传代。若传代效果不佳，建议直接采购我们的完全培养基进行对比。

二、细胞处理与培养

收货后，进行适当处理以确保细胞恢复至良好状态。最佳的做法是向瓶中灌注完全培养液并封闭瓶口，以确保运输细胞的稳定。

收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱内静置3-4小时以恢复细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并对不同倍数下的细胞拍照以备记录（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片对售后服务至关重要，若没有提供照片将默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%的情况下，收集培养瓶内的完全培养液于离心管中，并留下5ml的完全培养基，放入37℃、5%CO2的培养箱中培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行洗涤1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状况。若大多数细胞变圆并脱落，及时轻敲培养瓶，随后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻柔吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移悬液至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml的完全培养基重悬。
4. 按照1:2比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS对细胞进行清洗。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞情况；待细胞回缩变圆后，迅速加入5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打细胞使之脱落，并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，向沉淀中加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后续要转入液氮罐，需在-80℃环境中存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（建议佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，至冻存管内无结晶后，使用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移入含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

由于某些细胞的贴壁性较差，在运输过程中可能发生细胞脱落，这属于正常现象。若脱落较多，请收集培养瓶内的培养液至离心管，1000rpm离心5分钟，再进行后续处理。

五、售后条款

尊龙凯时-人生就是博始终关注客户的反馈与需求。请依据以下条款进行确认：

1. 若细胞在运输过程中出现问题，如细胞丢失或培养液漏液等，我们将负责重发；
2. 若细胞收到后48小时内发生污染，请提供真实实验结果，我们将核实后重发；
3. 若细胞在复苏后状态不佳，需提供真实、清晰的细胞状态照片以进行重发；
4. 若细胞收到后未在两天内联系，视为产品状况合格；
5. 其他需视具体情况进行处理。

对于不符合重发条件的情况，与客户造成的细胞污染或培育不当等情形，尊龙凯时-人生就是博将无法重新发货。请妥善操作，确保细胞的正常生长与存活。