尊龙凯时-人生就是博的人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
贴壁传代方法：建议以1:2比例进行首次传代
传代情况：每2天换液
备注：使用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培养至良好状态，再添加完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后在超净台内进行无菌操作。细胞瓶需放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以恢复细胞状态，然后进行后续处理。观察细胞生长情况，并进行多倍数拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片默认为收到状态良好。

1. 细胞传代

若细胞未达到80%的汇合度，收集瓶中的培养液至离心管中，留下5ml完全培养基在37℃和5% CO2的环境中培养。如果细胞密度超过80%，可以进行传代，步骤如下：

1. 弃去上清液，用不含钙和镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞情况，如果大部分细胞变圆并脱落，立即返回操作台，轻敲培养瓶并加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

2. 细胞冻存

细胞长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟；弃去上清后，沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。将冻存细胞放入-80℃冰箱保存，如有后续转移至液氮罐，需在-80℃冷冻至少24小时。

3. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），立刻置入37℃水浴中解冻，直至无冰晶形成，随后用75%酒精擦拭管外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。次日更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

三、注意事项

一些细胞可能在运输过程中发生脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养液收集至离心管，进行离心处理，沉淀后加入胰酶进行消化。最后按1:2比例分瓶传代，并补充新培养基。

四、售后条款

1）细胞出现问题的重发条件：
- 运输中细胞丢失、瓶身破损等可重发；
- 收到48小时内如出现污染需提供实验结果；
- 常温发货细胞24小时后存活率低需提供照片可重发；
- 其他情况需按具体情况处理。

2）不予重发的情况：
- 由客户造成的污染；
- 客户操作不当导致细胞状态不良；
- 使用非推荐培养体系。

如有其他问题，请及时与我们联系。感谢您选择尊龙凯时-人生就是博，我们会竭诚为您服务!